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購買國外細(xì)胞株應(yīng)該注意的事項

[2010/11/24]

 

由于現(xiàn)在國內(nèi)的細(xì)胞庫資料不是很充足,而且比較零散,包括建株時的技術(shù)層面不一,沒有比較嚴(yán)格統(tǒng)一的操作規(guī)范,所以在遇到比較重要的實驗項目時,一般都比較傾向于購買國外的細(xì)胞株,但購買國外細(xì)胞株需要考慮的因素有如下幾點:

1、細(xì)胞株的生物等級,由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品,所以從國外購貨比較麻煩。

2、在購買國外細(xì)胞株時,需交待國外加比較多的干冰(一般在13公斤以上,采用比較密封的泡沫盒加套紙箱。

3、報關(guān)時盡量提供比較充足的證明材料,以免擔(dān)擱時間而導(dǎo)致干冰揮發(fā)完細(xì)胞株死亡,甚至于被退回給發(fā)貨人。

4、如果通過國外細(xì)胞株在國內(nèi)的代理商購買的話,合同中需注明以下一些內(nèi)容:

a.明確的到貨時間,這個時間需注明的是工作日,還是普通日。

b.采用什么樣的運輸方法?

c.如果屬于技術(shù)外的因素而細(xì)胞株無法培養(yǎng)活,供方需負(fù)什么樣的責(zé)任?

d.細(xì)胞株的詳細(xì)資料,以及細(xì)胞株的代數(shù),其中,ATCC的細(xì)胞株一般都在幾十代,這個需要與國外確認(rèn),IST-Banca可與他們的代理商聯(lián)系索取詳細(xì)資料!

e.需在合同中注明原裝進(jìn)口,避免相關(guān)公司魚龍渾雜,從國外購買回一株細(xì)胞株,經(jīng)過培養(yǎng)傳代后,同時供應(yīng)給幾個人;一般國外進(jìn)口的細(xì)胞株都會有原裝的凍存管,而且每一支凍存管上都會有批號,而且每次的批號都不一樣。

f.在決定購買細(xì)胞株之前,必須仔細(xì)閱讀他們的培養(yǎng)信息,所謂“細(xì)胞株未到,培養(yǎng)基先行一步”。

g.在接到細(xì)胞株后,最好要求供應(yīng)公司的人員現(xiàn)場參與,從而用于確認(rèn)責(zé)任。

h.在培養(yǎng)前,請確認(rèn)您的二氧化碳培養(yǎng)箱二氧化碳濃度的準(zhǔn)確性,國外的細(xì)胞株建議用進(jìn)口的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,比如:orange,corning, falcon品牌的培養(yǎng)瓶。

i.詢問你的代理商或者經(jīng)銷商,接到細(xì)胞株后是否需要離心置換出DMSO,因為有些細(xì)胞廠家建議不要離心,他們會認(rèn)為離心而導(dǎo)致的碎片比DMSO產(chǎn)生毒性的害處更大,如果可以離心,轉(zhuǎn)速不要過高,一般都在1000轉(zhuǎn)以下,此處需要注意,因為有的公司會拿這一點來拒絕索賠!

j.培養(yǎng)基的服務(wù),仔細(xì)與供應(yīng)商確認(rèn)培養(yǎng)基的品牌及份量,以免供應(yīng)商以些理由來推翻你索賠的理由。

k.在細(xì)胞株復(fù)蘇時,一定要先想好步驟再做,一步一步來做,避免導(dǎo)致操作中的污染,復(fù)蘇是一個非常重要的步驟,往往容易導(dǎo)致污染,然后為污染所導(dǎo)致的雜質(zhì)而傷透腦筋。

細(xì)胞運輸中,還要注意細(xì)胞株的反復(fù)凍融情況,有的供應(yīng)商在供應(yīng)細(xì)胞株或者培養(yǎng)基時,特別是需要低溫保存的培養(yǎng)基時,通常會出現(xiàn)運輸溫度與儲存溫度的差別,而導(dǎo)致培養(yǎng)基或細(xì)胞株融掉后又放進(jìn)低溫冰箱進(jìn)行凍存,然后再快遞給我們,特別是血清類制品,如果在接到培養(yǎng)基并解凍后,沉淀和絮狀物較多時,那就要懷疑是否是這種情況!

對于所買回來的細(xì)胞簽別,除了顯微鏡下的形態(tài)學(xué)觀察,還有就是特異性實驗,這也是比較重要的!細(xì)胞株有些時候復(fù)蘇后剛培養(yǎng)的時候,老師們發(fā)現(xiàn)從形態(tài)上判斷似乎不是自己所需要的細(xì)胞株,于是我就建議他做細(xì)胞屬性的特異性實驗,ATCC的技術(shù)資料最后面附有細(xì)胞株的代數(shù),以及細(xì)胞株經(jīng)過了哪些檢測,細(xì)胞株特異性實驗的方法,從而用以確認(rèn)真正是自己所需要的細(xì)胞株!凍存的細(xì)胞株,特別是從國外進(jìn)口的細(xì)胞株,應(yīng)該立即復(fù)蘇,盡量不要再凍存,反復(fù)凍融會導(dǎo)致細(xì)胞株復(fù)蘇后的活性低!第一次接種培養(yǎng)時,應(yīng)以進(jìn)口的25平方厘米的培養(yǎng)瓶為佳,現(xiàn)在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange價格比較公道5-6元/個,BD(Falcon)最貴10元左右每個,BD的產(chǎn)品一般用于醫(yī)院生殖中心實驗室人工受精卵的一到三代培養(yǎng)!ATCC的細(xì)胞株培養(yǎng)基分為完全培養(yǎng)基(原代培養(yǎng)),次培養(yǎng)基(傳代培養(yǎng)基),請大家要注意!

如果細(xì)胞運來后,應(yīng)該馬上進(jìn)行復(fù)蘇,復(fù)蘇時,迅速投入37攝氏度水浴中并不斷振搖,使之迅速融化,離心應(yīng)在1000轉(zhuǎn)/分以下,如果太高速會使本來脆弱的細(xì)胞產(chǎn)生較多的碎片,培養(yǎng)過程中,甚至?xí)驗樗槠霈F(xiàn)黑點(一般都是800r/min,5min),棄上清液,以去除二甲基亞砜。加入先前配好的培養(yǎng)基,并在50ml培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。


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